數(shù)字PCR可以直接計算目標序列的拷貝數(shù),因此無需依賴于對照樣品和標準曲線就可以進行精確的絕對定量檢測;此外,由于數(shù)字PCR在進行結果判讀時僅判斷有/無兩種擴增狀態(tài),因此也不需要檢測熒光信號與設定閾值線的交點,完全不依賴于Ct值的鑒定,因此數(shù)字PCR的反應受擴增效率的影響大大降低,對PCR反應抑制物的耐受能力大大提高;數(shù)字PCR實驗中標準反應體系分配的過程可以極大程度上降低與目標序列有競爭性作用的背景序列濃度,因此數(shù)字PCR技術也特別適合在復雜背景中檢測稀有突變。
微滴式數(shù)字PCR(Droplet Digital PCR, DDPCR)是第三代 PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶鏈式反應)技術,是一種對核酸分子進行絕對定量的方法。
DDPCR的原理是在PCR擴增前對樣品進行微滴化處理,即將含有核酸分子的反應體系分成成千上萬個納升級的微滴,其中每個微滴或不含待檢核酸靶分子,或者含有一個至數(shù)個待檢核酸靶分子。經PCR擴增后,逐個對每個微滴進行檢測,有熒光信號的微滴判讀為1,沒有熒光信號的微滴判讀為0,根據泊松分布原理及陽性微滴的個數(shù)與比例即可得出靶分子的起始拷貝數(shù)或濃度。
在ddPCR中的微液滴產生中,ddPCR-DG7500油相可以直接和PCR擴增試劑(包含待測的DNA樣品)注入到液滴合成芯片中,產生所需要尺寸的乳液滴微球。隨后,將獲得的乳液滴微球進行PCR擴增。
ddPCR-DG7500油相是一種包含PFPE-PEG混合結構的HFE7500油相溶液,可以直接用于ddPCR中的乳液微球產生,無需再進行二次處理。該油相可以幫助用戶節(jié)省實驗時間,獲得良好的實驗結果,同時把精力用于目標產物上,不用擔心因油相質量不穩(wěn)定而產生的不良目標產物。
ddPCR-DG7500油相試劑是一種液體狀態(tài),提供1mL包裝和2mL包裝的兩種規(guī)格。
名稱:數(shù)字PCR油相7500試劑
型號:ddPCR-DG7500
規(guī)格:液體狀態(tài),4℃環(huán)境保存,體積:1mL,EP管包裝,即開即用。